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植物組織培養常見問題解析
發布時間: 2019/10/22 11:47:32 來源:中國干果果業網   瀏覽次數:33


1. 培養基的配制注意事項

植物組織培養最常用到MS培養基,包含十幾種化合物。因為有些化合物相遇會發生化學反應產生沉淀,影響培養基的營養成分,準備MS培養基需要配制多種高倍母液。且配制母液時,尤其涉及大量元素的母液時,一定要等一種成分溶解之后,再緩慢的添加另一種成分,切記“一鍋煮”,即不能將各種化合物一齊添加進去。可選用Coolaber的MS培養基基鹽(PM1011)在自行加入蔗糖和瓊脂配制MS培養基,既經濟,更高效。


2. 滅菌后培養基不凝膠或者凝膠偏軟

植物凝膠、瓊脂都對酸性條件敏感,pH值低于5很難成膠或凝膠偏軟,切記高壓滅菌前調節培養基pH值(5.5-6.0)。植物凝膠對二價陽離子濃度有要求,也就是相對于MS培養基,1/2MS培養基中植物凝膠要適當增加用量。另外滅菌后,倒出培養基前一定將培養基搖勻(帶防燙手套),因為是瓊脂密度大底層含量高,容易造成培養基強度不均勻。選擇Coolaber改良MS培養基(PM10121,pH5.8±0.2)含蔗糖和瓊脂/植物凝膠,可以省去調pH步驟。


3. 水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分,在使用過程中有無區別?

水解酪蛋白對胚狀體、不定芽的分化有良好的促進作用,通常用量在500mg/L,不管是酸解還是酶解,作用都是一樣的,酶解更有利于發揮其作用。


4. 怎么溶解組培常用植物激素?

IAA、IBA、GA、玉米素、多效唑等應先溶解于少量95%的乙醇中,再加水定容配制成母液;如有結晶析出,可考慮用1/10體積的乙醇溶解后再定容;2,4-D易溶于堿性水溶液,可用少量1mol/LNaOH溶液溶解后再慢慢加水定容;KT6-BA先用少量的HCL溶解,再加水定容到一定的濃度。


5. 細胞分裂素使用濃度?

一般情況下在培養基中加入0.1~10.0mg/L的細胞分裂素(6-BA/KT/ZT),多數用1.0~2.0mg/L,KT濃度為0.5~2mg/L,這個也要根據實驗材料來調整。細胞分裂素可以單獨使用也可以與細胞生長素配合使用。


6. 哪些植物激素能高壓滅菌,哪些不能高壓滅菌。

IBA、NAA、6-BA、2,4-D可高溫高壓滅菌。 IAA、GA3、茉莉酸等不可高溫高壓滅菌,否則會分解失效,該類植物激素配制母液后需用0.22微孔濾膜過濾除菌,待培養基冷卻(50-60℃)后尚未凝膠前加入混勻。


7. 培養基的pH值會凝膠硬度有無影響。

有影響。若將培養基pH值調的過高(大于6),則培養基偏硬,增加接種的阻力,會對外植體造成損傷。若將培養基pH值調的過低(小于4.5),則培養基不能凝固,起不到固定外植體的作用。一般將培養基的pH調節至5.5~6.0為宜。


8. 滅菌過程會否影響培養基的pH值?

培養基中的蔗糖和激素在高溫滅菌過程中容易酸化,培養基pH值滅菌后會有所下降,滅菌前培養基的pH值偏低可能導致培養基不凝或偏軟。要求偏酸性的培養基可適當增加瓊脂或植物凝膠的用量。


9. 應用75%的酒精進行種子消毒的過程中需要注意的問題

種子在消毒過程中使用75%的酒精使用應慎重,酒精滲透力極強,消毒時間過長會直接影響種子發芽率,所以建議消毒時間不應超過1min。


10. 原始繁殖材料的消毒

組培中,作為原始繁殖材料的外植體消毒,直接影響整個培養過程的進行。從室外采回來的外植體需進行消毒,首先用自來水沖洗外植體,沖洗時間可根據采集部位不同而定,一般在5~15分鐘即可;關鍵在于在超凈臺中進行藥劑的處理,常用的藥劑處理有70%的乙醇溶液、9%的次氯酸鈉溶液、和0.1~0.2%的升汞溶液,具體可根據實驗材料而定。應注意的是經升汞滅菌的外植體必須用無菌水沖洗6~8次。

 

摘自植物科學最前沿

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